Polymerase chain reactoin (PCR)

Polymerase chain reactoin

(Reaksi Berantai dengan Bantuan Enzim Polymerase)

Istilah-istilah PCR

PCR, tempalate (DNA), enzim tag Polimerase, amplifikasi, eksponensial, reaksi berantai, denaturasi, annelling , extention, elogation, optimasi dan lain-lain.

PCR: Polymerase Chain Reaction
Purpose of PCR: untuk menggandakan DNA (amplification = exponential)
Proses PCR ditemukan oleh Dr. Kary Mullis, di Cetus pada tahun 1983.
Dr. Mullis mendapat penghargaan Nobel Prize pada bidang Kimia pada tahun 1993.

Bahan yang dibutuhkan:

  * template DNA

  * deoxynucleotide triphosphates (dNTP)

     (A, G, T, C)

  * DNA polymerase (enzim Tag Polymerase)

  * ATP  (energy) : Mg2+, Mg+

  * Primer : potongan DNA yg didesain khusus

                    utk mengawali sintesis DNA

Primer: Semakin panjang semakin spesifik

TAQ Polymerase

Enzim yang membantu terjadinya reaksi PCR

Taq DNA polymerase dibuat dari bakteri tahan panas Thermus aquaticus.

Bekerja pada suhu 72oC

Penggunaan  PCR :

1. Mendeteksi ada atau tidaknya gen target

2. Mengetahui adanya mutasi seperti atau insersi penyebab keragaman genetik 

3. DNA cloning

4. dsb….

Tiga tahap utama pada Reaksi PCR, yang terjadi dalam 30 sampai 40 siklus :

Denaturasi pada suhu 94 oC: dua utas DNA terpisah menjadi satu utas DNA.
Annealing (penempelan primer) pada suhu 45 – 60oC: primer menempel pada utas DNA cetakan.
Extension (pemanjangan) pada 72oC. Pemanjangan utas DNA yang telah terjadi kecococakan dgn primer dgn bantuan enzm tag polymerase dan penambahan dNTPs (mixture of deoxyribonucleotides A, C, T, G)

Pola penggandaan utas DNA yang terjadi selama reaksi PCR = Perbanyakan secara exponensial

Polymerase Chain Reaction (PCR)
Visualisasi of DNA

Prinsip gel electrophoresis
DNA memiliki muatan negatif
Gel sebagai media uji
Pemisahan DNA berdasarkan ukuran berat molekul

Electrophoresis Technique

Pemisahan molekul bermuatan berdasarkan ukuran pada media tertentu dalam medan listrik .
Komponen Elektroforesis:
* Produk (DNA template, PCR, RNA)
* Gel Agarose
* Buffer elektroforesis
* Ladder : penanda utk menentukan size band
* Medan listrik
Alat : – Electrophoresis chamber
– UV- transiluminator : visualisasi

Tag

Tinggalkan Balasan

Alamat email Anda tidak akan dipublikasikan. Ruas yang wajib ditandai *